努比亚山羊Myf6基因的克隆及组织表达研究

研究旨在克隆努比亚山羊生肌因子6(Myf6)基因,并对其进行生物信息学分析,检测Myf6基因在努比亚山羊不同组织的表达差异以及努比亚山羊和隆林山羊背最长肌组织的表达差异.以努比亚山羊背最长肌组织cDNA为模板,PCR扩增获得Myf6基因的完整编码区(CDS)后进行菌液验证,并进行序列相似性比对以及系统进化树构建;分析Myf6蛋白理化性质并预测其亲/疏水性,预测蛋白二级结构和三级结构.采用实时荧光定量PCR检测Myf6基因在努比亚山羊心脏、肝脏、脾脏、肾脏、背最长肌、皮下脂肪、瘤胃以及隆林山羊背最长肌中的表达.结果 显示,努比亚山羊Myf6基因CDS序列长729 bp,编码242个氨基酸.努比亚山羊Myf6氨基酸序列与绵羊、黄牛、猪、驴、人、小鼠的相似性分别为99.3％、98.8％、94.1％、93.8％、93.4％和89.0％.蛋白理化性质分析结果表明,山羊Myf6蛋白的分子质量为26.98 ku,为不稳定酸性蛋白;亲疏水性分析发现,该蛋白为亲水蛋白;跨膜结构和信号肽预测结果发现,该蛋白不含有跨膜结构和信号肽,不属于跨膜蛋白和分泌蛋白;二级结构预测结果显示,该蛋白主要由无规则卷曲(49.59％)构成,其次为α-螺旋(33.88％)、延伸链(9.50％)和β-转角(7.02％),三级结构预测结果与二级结构一致.实时荧光定量PCR结果显示,Myf6基因在努比亚山羊背最长肌的表达量最高,显著高于其他组织(P＜0.05),在肾脏的表达量最低,但与心脏、肝脏、脾脏、皮下脂肪、瘤胃等差异均不显著(P＞0.05);对比努比亚山羊和隆林山羊背最长肌的Myf6基因的表达情况发现,努比亚山羊的表达量显著高于隆林山羊(P＜0.05).试验为进一步揭示Myf6基因在肌肉分化中的作用提供了参考.