白藜芦醇对体外培养的水牛卵丘细胞增殖活力及其相关基因mRNA表达的影响

[目的]研究白藜芦醇(resveratrol,RES)对水牛卵丘细胞体外培养过程中细胞增殖活力、激素分泌、卵丘扩展及抗凋亡和抗氧化能力的影响.[方法]用不同浓度(0(对照组)、1、10、20、30、40、50和60 μmol/L)RES培养卵丘细胞,用CCK-8试剂盒测定细胞增殖活力,筛选最佳RES处理浓度及时间用于后续试验.用ELISA法测定培养液中卵丘细胞分泌的雌二醇(estradiol,E2)和孕酮(progesterone,P4)的含量,实时荧光定量PCR法测定卵丘细胞扩展、凋亡和抗氧化相关基因的相对表达量.[结果]与对照组相比,在体外培养24～36 h内,1、10和20 μmol/L RES组水牛卵丘细胞的增殖活力均有升高趋势,10 μmol/L RES处理36 h细胞活力最强,因此用于后续试验中细胞的处理.体外培养36 h时,10 μmol/L RES组细胞增殖能力和E2、P4的分泌显著增加(P＜0.05);10 μmol/L RES组卵丘细胞扩展相关基因穿透素3(PTX3)、前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)、抗凋亡基因B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和超氧化物歧化酶1(SOD1)基因mRNA相对表达量显著或极显著增加(P＜0.05;P＜0.01),而促凋亡基因Bcl-2相关蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和p21的表达量显著或极显著降低(P＜0.05;P＜0.01),透明质酸合酶2(HAS2)和过氧化氢酶(CAT)的表达量无显著差异(P＞0.05).[结论]培养液中添加10 μmol/L RES能够提高水牛卵丘细胞体外培养的增殖活力,促进卵丘细胞激素分泌和卵丘细胞扩展,并增强卵丘细胞抗氧化能力并减少细胞凋亡.