Purificación de catepsina L de 28 kda de Fasciola hepatica

El presente trabajo tuvo como objetivo aislar la proteinasa de 28KDa a partir del parasito Fasciola hepatica (Linnaeus, 1758). Esta cisteinil proteasa fue purificada por protocolos clasicos tales como la precipitacion con sulfato de amonio, cromatografia de exclusion molecular G-25, G-75, cromatografia de afinidad tiol sefarosa 4B y electroforesis SDS-PAGE al 12 %, siendo monitoreada la actividad enzimatica en cada etapa de la purificacion. La cisteinil proteinasa se observo como una banda homogenea y pura en el gel SDS-PAGE, la cual tiene una recuperacion -1 -1 de 12,7%, 337,500 umol min mg de actividad especifica y un numero de 260 veces de purificacion de la enzima respecto del extracto crudo. Mediante este esquema se purifico la catepsina L de 28 KDA a partir del regurgitado de una manera efectiva comparado con otras - alternativas. La cantidad de proteina obtenida fue de 0,032 mg·mL ¹. La enzima migro como una banda homogenea durante la electroforesis en gel de poliacrilamida con SDS-PAGE al 12,5%, y el peso molecular determinado fue de aproximadamente 28 Kda de acuerdo a su movilidad relativa