胶质瘤细胞外泌体通过miR-125b对细胞增殖凋亡的影响

目的 探索胶质瘤细胞来源的外泌体对细胞增殖凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法 高速离心法提取胶质瘤细胞U251外泌体,通过电镜及纳米粒径分析外泌体形态,Western blot检测外泌体特征性蛋白表达.在U251细胞培养基中分别加入浓度为100 μg/ml的外泌体悬液30μl(外泌体组)或等量不含外泌体培养基(对照组),通过双荧光染色法验证外泌体能否进入U251细胞;CCK-8及流式细胞法检测细胞增殖凋亡的变化.通过RT-PCR法筛选U251外泌体与人星型胶质细胞外泌体中差异性表达的miRNAs.最后,将miR-NC、miR-125b mimics或miR-125b inhibitor转染U251细胞,重新提取外泌体后加入细胞培养基,采用CCK-8及流式细胞法检测U251细胞增殖凋亡变化.结果 U251细胞分离的外泌体为圆形或卵圆形囊泡状小体,直径范围约100 nm,富含CD63和CD9蛋白.在U251细胞培养基中加入外泌体悬液后,外泌体能够被U251细胞吞噬.CCK-8及流式细胞法显示:外泌体组细胞增殖活性高于对照组,凋亡比例低于对照组.RT-PCR显示:U251细胞外泌体miRNA-125b含量高于人星型胶质细胞外泌体.将miR-NC、miR-125b mimics或miR-125b inhibitor转染U251细胞后,分别提取三组细胞外泌体并加入U251细胞培养基,miR-125b in-hibitor组细胞增殖活性低于miR-NC组,凋亡比例高于miR-NC组;miR-125b mimics组细胞增殖活性高于miR-NC组,凋亡比例低于miR-NC组.差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 胶质瘤细胞来源的外泌体可通过miR-125b,促进胶质瘤细胞增殖,抑制细胞凋亡.