产4-乙烯基愈创木酚细菌的筛选及酚酸脱羧酶基因的克隆与表达

采用传统筛菌方法从发酵醅中筛选产4-乙烯基愈创木酚(4-VG)的细菌,通过形态观察及分子生物学技术对其进行菌种鉴定,并采用基因克隆技术对其酚酸脱羧酶基因进行克隆与异源表达.结果表明,筛选得到一株产4-VG的菌株NF1,其4-VG产量为0.30 mg/g,并鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).从该菌株中成功克隆得到酚酸脱羧酶基因,并在大肠杆菌(Escherichia coli)表达系统中进行诱导表达,以50 mmol/L的阿魏酸为底物,酚酸脱羧酶酶活力为66.74 IU/mL,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测,该酶的分子质量约为20 kDa.