近平滑假丝酵母ATCC 7330羰基还原酶CpCR的表达及酶学性质研究

通过构建重组菌Escherichia coli BL21(DE3)/pACYC Duet-1-cpcr,表达带有His标签的近平滑假丝酵母Candida parapsilosis ATCC 7330羰基还原酶CpCR基因,并采用Ni-Agarose亲和层析对重组酶CpCR进行分离纯化和酶学性质研究.重组酶CpCR的基因序列全长1107 bp,含有368个氨基酸,分子质量在41 kDa左右,比酶活力为20 U/mg;该酶在4～33℃的温度范围稳定性较好,相对酶活力在80％以上,T50值为37℃;该酶的pH适宜范围在6.2～7.5,在中性条件下稳定性最好;Cu2+对该酶有强烈的抑制作用,在1 mmol/L条件下,相对酶活力下降30％,在5 mmol/L条件下,相对酶活下降50％;该酶对底物苯甲醛、正丁醛亲和能力强于4-氯-3-酮基-丁酸乙酯(4-chlor-3-keto-butyrate-ethyl ester,COBE),对苯甲醛或正丁醛的催化效率是对COBE的20倍左右;该酶是一种NADPH依赖型的羰基还原酶.本研究为羰基还原酶CpCR分子改造和催化应用提供了重要的基础数据.