水疱性口炎病毒核蛋白的纳米抗体和多聚抗核蛋白纳米抗体的原核表达及功能验证

分别制备出高可溶性的抗水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)核蛋白纳米抗体VSVNb和重组截短型铁蛋白与抗VSV核蛋白串联的多聚纳米抗体的融合蛋白FnL-VSV,并对融合蛋白VSVNb和FnL-VSV在VSV诊断中的应用进行了初步探索.从羊驼(Vicugna pacos)中获得抗VSV核蛋白的纳米抗体序列,命名为VS-VNb;从激烈火球菌(Pyrococcus furiosus)中分离出来的铁蛋白(encapsulin)进行截短后,和从羊驼中获得的抗VSV核蛋白的纳米抗体序列进行串联,命名为FnL-VSV.载体构建后用大肠杆菌表达系统进行融合蛋白的原核表达,经Ni2+纯化后获得单一纳米抗体VSVNb;经硫酸铵盐析纯化得到单一融合蛋白FnL-VSV,并进行电镜检测.将制备的重组蛋白VSVNb和FnL-VSV分别进行HRP标记后,和VSV毒株用作直接ELISA试验.结果 表明,原核表达与纯化后获得了纯度较高的融合蛋白VSVNb和FnL-VSV;电镜结果显示,重组蛋白FnL-VSV自组装形成了直径为20 nm纳米样颗粒;直接ELISA检测结果表明,在抗原浓度一定的条件下,重组蛋白VSVNb和FnL-VSV均与特异性抗原VSV毒株在较低浓度条件下结合,具有较高活性,且重组蛋白FnL-VSV比VSVNb D450nm数值更大;而在重组蛋白VSVNb和FnL-VSV浓度一定的条件下,其能敏感的识别低浓度到高浓度区间的特异性抗原.本试验建立了稳定获得重组蛋白VSVNb和FnL-VSV重组蛋白质的方法,并初步探索了其在直接ELISA中的使用.成功制备了重组蛋白VSVNb和FnL-VSV,为进一步研究纳米抗体在VSV的诊断及后续抗病毒药物的研究奠定了基础.