杨桃根活性成分对高糖诱导H9c2心肌细胞损伤的改善作用及机制

目的:研究杨桃根活性成分2-十二烷基-6-甲氧基-2,5-二烯-1,4-环己二酮(DMDD)对高糖诱导H9c2心肌细胞损伤的改善作用及机制.方法:将H9c2心肌细胞分为正常组、高糖组、渗透压对照组和DMDD高、中、低浓度组(8、4、2μmol/L).正常组和高糖组细胞分别加入低糖(含5.5 mmol/L葡萄糖,下同)、高糖DMEM培养基(含33.3 mmol/L葡萄糖,下同)培养48 h;渗透压对照组细胞加入含27.5 mmol/L甘露醇的低糖DMEM培养基培养48 h;DMDD各浓度组细胞先加入高糖DMEM培养基培养24 h,再加入含相应浓度DMDD的高糖DMEM培养基继续培养24 h.各组细胞培养结束后,采用MTT法检测细胞存活率;采用相应试剂盒检测细胞上清液中活性氧簇(ROS)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、乳酸脱氢酶(LDH)的活性;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)的水平;采用吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)染色法检测细胞凋亡情况;采用Western blot法检测细胞中凋亡相关蛋白[活化的胱天蛋白酶3(cleaved caspase-3)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)]的表达水平以及核因子κB(NF-κB)/NF-κB抑制蛋白α(IκBα)信号通路相关蛋白(NF-κB p65、IκBα)的磷酸化水平.结果:与正常组比较,高糖组细胞存活率、GSH-Px活性、Bcl-2蛋白表达水平均显著降低(P<0.01);ROS、LDH活性,TNF-α、IL-6水平,Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平和NF-κB p65、IκBα蛋白磷酸化水平均显著升高(P<0.01);细胞呈橙黄色荧光,且形态模糊的细胞明显增多,表现出明显的凋亡状态.渗透压对照组细胞上述指标与正常组比较差异无统计学意义.与高糖组比较,DMDD各浓度组细胞上述指标活性或水平(低浓度组细胞存活率、LDH活性除外)均显著逆转(P<0.05或P<0.01);细胞中橙黄色荧光明显减少,细胞形态较完整.结论:DMDD可改善高糖诱导的H9c2心肌细胞损伤;其作用机制可能与抑制氧化应激和炎症反应、调控凋亡相关蛋白和NF-κB/IκBα通路相关蛋白的表达有关.