怀牛膝多糖的柱前衍生化-HPLC指纹图谱建立及单糖成分含量测定

目的:建立怀牛膝多糖的柱前衍生化-高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,测定其主要单糖成分的含量,为怀牛膝饮片的质量评价提供参考.方法:以10批不同生产厂家的怀牛膝饮片为样品,采用水提醇沉法提取其多糖后,以三氟乙酸进行水解,再采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮衍生化处理后,进行HPLC分析.色谱柱为Hanbon Hedera C18,柱温为30℃,流速为1.2 mL/min,流动相为乙腈-0.02 mol/L乙酸铵溶液(梯度洗脱),检测波长为250 nm,进样量为20μL.采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012A版)建立10批怀牛膝多糖的HPLC指纹图谱并进行相似度评价,通过与对照品比对进行共有峰指认,并采用SPSS 25.0软件进行聚类分析.采用HPLC法对指认的单糖成分进行含量测定.结果:10批怀牛膝多糖样品的相似度均大于0.95;共标定了9个共有峰,并指认了其中5个共有峰,分别为无水葡萄糖(峰1)、甘露糖(峰2)、鼠李糖(峰4)、半乳糖醛酸(峰5)、阿拉伯糖(峰7).聚类分析结果显示,编号为S1的样品单独为一类,编号为S2、S5、S8和S9的样品聚为一类,编号为S3、S4、S6、S7和S10的样品聚为一类.含量测定结果显示,10批样品中无水葡萄糖的含量为6.17～17.55 mg/g、甘露糖的含量为3.31～7.66 mg/g、鼠李糖的含量为38.80～73.97 mg/g、半乳糖醛酸的含量为2.49～8.95 mg/g、阿拉伯糖的含量为11.30～28.58 mg/g.结论:本研究建立的柱前衍生化-HPLC指纹图谱及单糖组分的含量测定方法可为怀牛膝饮片质量评价提供参考.