长链非编码RNA PVT1对卵巢癌细胞的影响及其机制

目的 探究长链非编码RNA(lncRNA)PVT1在卵巢癌细胞中的表达特征及其对细胞上皮-间质转化(EMT)和侵袭、迁移的影响.方法 逆转录实时荧光定量PCR技术(RT-qPCR)检测正常卵巢上皮细胞IOSE80及卵巢癌细胞Skov3、ocvar3、A2780、HO8910中PVT1的表达.体外采用慢病毒介导的细胞转染技术上调A2780细胞中PVT1的表达,并干扰Skov3细胞中PVT1的表达,RT-qPCR检测PVT1过表达及干扰模型中PVT1 mRNA的表达,Transwell实验检测各组细胞的侵袭和迁移.RT-qPCR和免疫印迹法(Western blotting)检测各组细胞中U1核小核糖核蛋白SNRPA、NGF、Vimentin、ZEB-1及E-钙黏蛋白(E-cadherin)的mRNA和蛋白表达.结果 与正常卵巢上皮细胞相比,各卵巢癌细胞中PVT1表达均明显升高(P<0.05),PVT1在Skov3细胞中表达水平最高,而在A2780细胞中表达相对较低(P<0.05).在A2780细胞中成功过表达PVT1(空白组及过表达组),在Skov3细胞中成功干扰PVT1表达(对照组、干扰1组、干扰2组);过表达组侵袭及迁移细胞数量显著高于空白组,而干扰1组、干扰2组侵袭及迁移细胞数量显著低于对照组(P<0.01).过表达组细胞SNRPA、NGF、Vimentin、ZEB-1的mRNA及蛋白表达水平显著高于空白组,E-cadherin的mRNA及蛋白表达水平显著低于空白组(P<0.01);干扰1组、干扰2组SNRPA、NGF、Vimentin、ZEB-1的mRNA及蛋白表达水平显著低于对照组,E-cadherin的mRNA及蛋白表达水平显著高于对照组(P<0.01).结论 PVT1可通过上调SNRPA、NGF的表达,促进卵巢癌细胞的EMT过程及侵袭、迁移能力.