辣椒素受体TRPV1对脑缺血再灌注小鼠抑郁行为及神经元自噬的调控作用

目的:探讨辣椒素受体(TRPV1)对小鼠神经元自噬和抑郁样行为的影响及分子机制。方法:87只C57雄性小鼠按照随机数字表法分为假手术组(Sham组)、脑缺血/再灌注组(I/R组)、辣椒平(Capsazepine，CPZ)预处理的脑缺血/再灌注组(I/R+CPZ组)，剔除因不合要求3只外，每组28只。I/R组小鼠采用右侧大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion，MCAO)建立脑缺血再灌注模型。I/R+CPZ组小鼠在造模前，侧脑室注射CPZ。Sham组小鼠只插入线栓，不进行动脉栓塞。采用mNSS评分评价神经功能缺失程度，用悬尾实验和强迫游泳实验检测小鼠的抑郁样行为，用TTC染色观测梗死体积，用HE染色观察杏仁核病理变化，用Western blot检测Beclin-1、LC3、p62及p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白的表达。使用SPSS 23.0软件进行统计分析，两组间比较采用 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:神经功能缺损评分结果显示，I/R+CPZ组[(9.77±2.32)分]小鼠的评分较I/R组[(12.85±2.73)分]明显降低( t＝3.10， P<0.01)。与I/R组比较，I/R+CPZ组小鼠的悬尾不动时间[(93.28±50.69)s，(143.80±35.61)s； t＝2.94， P<0.01]和强迫游泳不动时间[(139.50±13.33)s，(175.30±19.78)s； t＝5.40， P<0.01]均显著降低。TTC染色显示，I/R+CPZ组小鼠的脑梗死体积较I/R组显著减少[(19.30±5.19)%，(33.60±3.90)%； t＝5.40， P<0.01)。HE染色显示，与I/R组比较，I/R+CPZ组小鼠的杏仁核区细胞数增加，排列紧密，核固缩深染减少。Western blot结果发现，与I/R组比较，I/R+CPZ组小鼠杏仁核区自噬相关蛋白Beclin-1( t＝2.94， P<0.05)和LC3( t＝3.16， P<0.05)的表达水平下调，而p62( t＝3.60， P<0.05)、p-PI3K( t＝7.79， P<0.01)、p-AKT( t＝4.15， P<0.01)和p-mTOR( t＝6.15， P<0.01)的表达均上调。 结论:脑缺血/再灌注激活神经元自噬，而CPZ可能调控PI3K-AKT-mTOR通路，进而抑制自噬的过度激活，从而起到神经保护和改善卒中后抑郁样行为的作用。