雷帕霉素经自噬/Nrf2途径调节肿瘤相关巨噬细胞功能在膀胱癌进展中的作用

目的:探讨雷帕霉素诱导自噬对肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)功能的影响机制及其在膀胱癌进展中的作用.方法:诱导并鉴定TAMs,用雷帕霉素诱导TAMs自噬,电镜观察自噬小体数量变化,免疫荧光检测自噬标记物LC3表达.建立TAMs与膀胱癌细胞非接触共培养模型,划痕和Transwell实验观察自噬增强的TAMs对膀胱癌细胞迁移侵袭的影响,Western blot检测侵袭相关分子的表达.通过RT-PCR和ELISA检测雷帕霉素干预后TAMs细胞因子的表达变化,免疫荧光检测Nrf2表达.通过siRNA干扰TAMs Nrf2表达,RT-PCR检测相关分子的表达变化.收集临床膀胱癌及对应的癌旁组织,免疫荧光检测TAMs标记物CD206和LC3表达,免疫组化检测N-cadherin和Vimentin表达.结果:雷帕霉素处理后,TAMs自噬小体数量和LC3表达增加,且TAMs显著促进膀胱癌细胞的迁移侵袭能力以及N-cadherin、Snail和Slug等因子的表达,3-MA可抑制雷帕霉素的作用.VEGF、IL-10和Mgl1等细胞因子以及转录因子Nrf2的基因和蛋白表达水平在雷帕霉素干预的TAMs中均明显增加,并可被3-MA部分抑制.除此之外,SiNrf2可抑制arg-1、vegf和il-10等TAMs细胞因子的表达.膀胱癌组织CD206和LC3表达均明显增加,大部分CD206阳性细胞的LC3表达增加,且膀胱癌组织N-cadherin和Vimentin的表达增加.结论:雷帕霉素诱导自噬通过Nrf2增强TAMs功能,从而促进膀胱癌进展.