β-桉叶醇体外对IEC-6细胞增殖和迁移的影响

目的 通过体外大鼠小肠隐窝细胞(Intestinal epithelial cells,IEC-6)实验观察β-桉叶醇对于小肠细胞修复功能的影响及可能机制.方法 采用不同浓度(0、10、20、40、80、160mol·L-1)β-桉叶醇处理IEC-6细胞,用MTT法检测24、48、72 h细胞增殖情况.采用酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测细胞鸟氨酸脱羧酶(ODC)浓度,采用细胞划痕法测定β-桉叶醇对细胞迁移的影响,用流式细胞仪检测细胞内游离钙[Ca2+]cyt浓度和细胞周期情况,并用RT-PCR和蛋白印迹法(Western Blot)分析TRPC1蛋白表达.结果 与空白对照组相比,10mol·L-1β-桉叶醇对IEC-6细胞增殖有显著影响(p＜0.01),且划痕实验结果表明β-桉叶醇能快速刺激损伤后IEC-6细胞迁移,对细胞迁移的促进作用明显;ELISA实验结果表明,β-桉叶醇组细胞中ODC浓度高于空白组(P＜0.05);流式细胞实验表明β-桉叶醇组细胞内Ca2+浓度高于空白组,有显著性差异(p＜0.05).细胞周期分布较空白组在G1期和S期有显著性差异(p＜0.01);RT-PCR和Western blot实验结果表明β-桉叶醇组较空白组能促进TRPC1蛋白表达.结论 β-桉叶醇促进IEC-6细胞增殖和迁移可能是通过增加ODC、Ca2+、[Ca2+]cyt的浓度、促使TRPC1蛋白表达而增强TRPC1介导的Ca2+内流,而Ca2+在上皮细胞增殖和迁移中发挥着重要作用.