鼠源胰岛素降解酶的原核表达及活性检测

胰岛素降解酶是维持体内糖代谢平衡和蛋白质稳态的关键蛋白质,也是2型糖尿病及阿尔茨海默病临床药物的重要靶点.本研究构建了野生型鼠源胰岛素降解酶的大肠杆菌ppSUMO表达系统,并完成了鼠源胰岛素降解酶的表达纯化及功能测定.采用ppSUMO表达系统得到的融合蛋白具有组蛋白标签和ULP1酶切位点,通过ULP1酶对亲和纯化得到的融合蛋白进行酶切,可以获得无标签胰岛素降解酶.另外,根据胰岛素降解酶的理化性质(如等电点、相对分子质量),采用离子交换层析和凝胶过滤层析两种纯化方法,可完成蛋白质的纯化.纯化所获得的野生型胰岛素降解酶通过特异性的荧光底物Mca-RPPGFSAFK(Dnp)进行活性检测.本方法获得的野生型胰岛素降解酶的纯度约为90％,对已知抑制剂杨梅素具有很好的抑制响应.以上结果提示,该表达系统获取的胰岛素降解酶具有较好的纯度和活性,为日后胰岛素降解酶的结构与功能研究及体外临床药物研发奠定了实验基础.