丙戊酸通过下调EGFR的表达抑制三阴性乳腺癌细胞生长增殖并诱导凋亡

目的 探讨丙戊酸(VPA)对三阴性乳腺癌可能的治疗作用,并初步探索其可能的分子机理.方法 MTS法结合克隆形成实验分析不同浓度VPA(0、0.25、0.5、1、2、4 mmol/L)处理对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞存活的影响,结晶紫染色法检测不同浓度VPA(0、0.125、0.25、0.5 mmol/L)作用后前述细胞克隆形成情况;Western blot法检测凋亡指示蛋白多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP),并结合凋亡特异性ELISA法分析VPA(0.5 mmol/L)处理24、48 h诱导的MDA-MB-231细胞凋亡效应,qRT-PCR法检测其表皮生长因子受体(EGFR)mRNA的表达水平;Western blot法分析VPA(0.25、0.5、1 mmol/L)处理24 h对MDA-MB-231细胞中EGFR的表达及其下游Akt信号通路的影响;miRNAs特异qRT-PCR法分析VPA(0.5 mmol/L)处理24、48 h对MDA-MB-231细胞中miR-133a和miR-133b表达的影响;采用单因素方差分析及Dunnet-t检验进行统计学分析.结果 与对照组VPA(0 mmol/L)比较,不同浓度(0.25、0.5、1、2、4 mmol/L)VPA干预组MDA-MB-231细胞的存活率(100﹪±0.46﹪比86.97﹪ ±0.21﹪、77.66﹪±0.17﹪、66.81﹪±0.59﹪、46.68﹪±0.45﹪、15.89﹪±0.25﹪)及细胞平均克隆数均[(769.33±22.03)个比(599.33±39.00)个、(492.00±52.00)个、(263.33±14.74)个]降低,且呈浓度依赖性(P均<0.05).0.5 mmol/L VPA处理24 h对体外培养MDA-MB-231细胞凋亡率差异无统计学意义(0.13﹪±0.00﹪比0.14﹪ ±0.00﹪,P>0.05),但处理48 h后MDA-MB-231凋亡率(0.13﹪±0.00﹪比0.80﹪±0.00﹪)升高,差异有统计学意义(P<0.05).RT-qPCR结果表明,0.5 mmol/L VPA处理24、48 h对MDA-MB-231细胞中EGFR mRNA的表达水平无明显影响(差异具有统计学意义但无生物学意义,P<0.001).Western blot结果则显示VPA(0.25、0.5、1 mmol/L)处理24 h可明显下调MDA-MB-231细胞中EGFR的表达,相应的下游Akt信号通路被抑制.此外,miRNA特异RT-qPCR分析结果表明,与对照组(0 h)比较,0.5 mmol/L VPA处理24、48 h上调靶向EGFR mRNA的miR-133b的表达(1±0比6.21±0.89、4.58±0.62)(P<0.001).结论 VPA在体外显示较好的抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞生长增殖并诱导其凋亡效应;初步的机制探讨提示,这可能与VPA处理上调靶向EGFR mRNA的miR-133b的表达特异下调MDA-MB-231细胞中EGFR的表达,进而抑制下游Akt信号通路有关;VPA作为三阴性乳腺癌患者治疗可能的候选药物值得进一步深入研究.