1株高滴度噬斑型三型副流感病毒野毒株的分离纯化及鉴定

目的 从临床标本中分离1株人三型副流感病毒(human parainfluenza virus type 3,HPIV-3)野毒株,并进行鉴定.方法 将下呼吸道感染患儿下呼吸道分泌物通过人胚肺二倍体细胞(WI-38)传代培养分离并噬斑克隆纯化病毒.二代基因测序测定病毒全基因序列;蔗糖密度超速离心纯化病毒,电镜观察病毒大小和形态;SDS-PAGE和Western blot鉴定病毒蛋白;检测病毒在不同宿主细胞上的增殖能力和噬斑形成能力以及在体外传代的遗传稳定性和增殖稳定性.结果 通过大量临床标本的传代筛选和克隆纯化,得到1株去除特定外源因子的HPIV-3野毒株HPIV3LZ17-28C19,全基因测序显示此毒株与HPIV-3基因组核苷酸序列的同源性高达99.14％;蔗糖密度超速离心纯化的毒株在电镜下可见长轴径150～300 nm的具有脂质外膜的HPIV-3病毒颗粒,含有HPIV-3的结构蛋白HN和F,在WI-38、Vero和MA104细胞中高滴度增殖,滴度在107～109 copies/mL,可在Vero和MA104细胞上形成明显均一的噬斑,且在有限传代中具有遗传稳定性和增殖稳定性.结论 本研究获得了1株高滴度噬斑型无特定外源因子的HPIV-3野毒株,对HPIV-3疫苗的研发以及HHV-3感染动物模型和各种检测方法的建立具有重要意义.