成纤维细胞生长因子20单克隆抗体的制备及鉴定

构建表达重组人成纤维细胞生长因子20(fibroblast growth factor 20,FGF20)原核表达载体,并制备抗FGF20单克隆抗体,为开发新的药物奠定基础.构建pET24a-SUMO-hFGF20原核表达载体,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达.经镍NTA亲和层析柱纯化融合蛋白,SUMO酶酶切后,再次经镍NTA亲和层析柱纯化,SDS-PAGE法检测目的蛋白纯度.以重组FGF20蛋白免疫Balb/c小鼠,常规方法制备FGF20单克隆抗体,采用protein G柱分离纯化,SDS-PAGE法检测抗体纯度,ELISA法检测抗体效价和亚型,Western blot和SPR法测定抗体亲和力.成功构建pET24a-SUMO-hFGF20重组质粒.经分离纯化后获得FGF20蛋白相对分子质量为23 kD.得到1株ELISA检测强阳性杂交瘤细胞株,单克隆抗体纯化后,效价为1:25600,亚型为IgG1,可以与商品化抗原结合,亲和力为1.07×10-7 mol/L.通过构建、表达和纯化重组蛋白,成功制备出抗FGF20蛋白高亲和力单克隆抗体.