可控高突变率枯草芽孢杆菌工程菌株的构建及应用

[背景]适应性实验室进化是运用于菌株改良的定向进化方法之一.适应性进化已成功应用于扩大底物利用范围和提高底物(产物)耐受性.由于微生物存在错配修复机制,使得菌株自然突变率水平极低,实验室适应性进化周期长,容易导致传代过程染菌而失败.[目的]获得可控高突变率的枯草芽孢杆菌工程菌株.[方法]采用无痕等位基因置换系统,将枯草芽孢杆菌负责错配修复机制的MutSL操纵子进行启动子置换为严谨表达、可诱导的木糖启动子.[结果]通过向培养基中添加不同浓度诱导物,可控制工程菌株所需突变率水平.将高突变工程菌株应用于苯乙醇耐受性实验,结果表明高突变工程菌株相较于出发菌株,对毒性产物苯乙醇具有更好的适应性,更容易获得突变菌株.将该高突变工程菌株应用于对生长有较大抑制的底物粗甘油的适应性进化实验,筛选得到的进化菌株相比出发菌株具有更短的延滞期、更高的生物量以及更大的比生长速率.[结论]该高突变率工程菌株具有较好的可进化性和适应性,可应用于适应性进化实验,具有广泛的应用前景.