对虾白斑综合征病毒荧光RPA检测方法的建立和临床应用
China Port Science and Technology（2021）
摘要
为缩短口岸通关检测时限,提高检测灵敏度,本研究对进出口重点监控动物疫病对虾白斑综合征建立重组酶聚合酶扩增荧光RPA方法.根据WSSV病毒基因组特异性序列设计引物探针,优化并建立荧光RPA方法,进行特异性、敏感性、重复性验证.结果 显示:所建立的方法对对虾、鱼基因组和其他疫病无扩增,方法特异性高;用10个同样浓度样品做重复性验证,CT值变异系数为3.08％,所有样品扩增曲线均一致;将阳性质粒倍比稀释进行方法灵敏度测试,方法扩增最低浓度为1×101 copies/μL.使用方法进行临床应用,每个样品用荧光PCR方法进行对比验证,结果显示,两种方法检测结果一致,而且弱阳性样品对应CT值相近.该方法的构建和临床应用数据可为口岸防控WSSV疫病提供重要技术参考.
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