水稻OsFTL12和OsFTL13基因双突变体的创建及新型编辑类型的鉴定

为了研究水稻成花素家族基因的功能,在OsFTL12基因的编码区选择2个靶点,OsFTL13基因的编码区选择1个靶点,构建各个靶点的融合表达盒,将其连接到CRISPR-Cas9载体中,获得包含OsFTL12和OsFTL13基因靶点的CRISPR-Cas9重组载体.以粳稻品种中花11为材料,利用农杆菌介导的遗传转化法,创建水稻OsFTL12和OsFTL13两个基因的双突变体,对获得的阳性转基因植株进行测序鉴定.结果显示:阳性转基因植株中包括3种不同类型的编辑突变体,其中,OsFTL13基因仅有1种编辑类型,为1 bp缺失;而OsFTL12基因有3种编辑类型,分别为纯合1 bp缺失、纯合19 bp缺失和双等位突变.进一步分析双等位突变,发现该突变体的一条同源染色体含有1 bp缺失,而另一条同源染色体上有376 bp的CRISPR-Cas9载体序列插入,这在CRISPR-Cas9编辑系统中鲜见.通过自交获得了纯合的CRISPR-Cas9载体序列插入突变体.