合浦珠母贝nacrein基因真核表达载体构建及生物信息学分析

目的 克隆合浦珠母贝(Pinctada fucata)水溶性基质蛋白Nacrein的基因,构建真核表达载体,并对Nacrein蛋白进行生物信息学分析.方法 根据GenBank公布的Pinctada fucata nacrein基因CDS序列(D83523.1),设计合成特异引物,以合浦珠母贝肉cDNA为模板,克隆获得nacrein基因,构建到真核表达载体pPICZαA上,PCR筛选阳性克隆子,并对其进行测序鉴定和生物信息学分析.结果 合浦珠母贝nacrein基因全长1344 bp,编码447个氨基酸,分子量约为50.11 kD,为一稳定的亲水性蛋白质,无跨膜结构域,为分泌性胞外蛋白质.具有2个碳酸酐酶结构域和1个Gly-Xaa-Asn重复结构域,存在多个蛋白酶酶切位点,其降解片段可能具有抑菌活性,且含有多个磷酸化位点,Nacrein蛋白糖基化程度低.Nacrein蛋白二级结构主要为无规卷曲,其次为α-螺旋和延伸链及β-折叠,其三维结构与所预测的Nacrein蛋白二级结构一致.结论 成功克隆获得合浦珠母贝nacrein基因及构建真核表达载体,并进行了生物信息学分析,为后续深入开发Nacrein蛋白生物功能提供了一定的理论和实验数据.