微管蛋白β-Tubulin在二、三倍体虹鳟(Oncorhynchus mykiss)表达与定位分析

微管构成纺锤体主要架构,在染色体配对与分离过程起重要作用.通过β-tubulin基因克隆,实时荧光定量,Western blot及免疫组织化学技术对三倍体虹鳟卵巢败育根本原因进行探究.结果表明β-tubulin基因开放阅读框1 533 bp,编码424个氨基酸.β-Tubulin蛋白质的相对分子量为47.5 kDa.虹鳟(Oncorhynchus mykiss)与银大马哈鱼(O.kisutch)同源性高达99.59％.系统发育进化树显示,虹鳟与大鳞大马哈鱼(O.tshawytscha)和红点鲑(Salvelinus alpinus)聚为一支.实时定量检测发现β-tubulin基因在二倍体雌性虹鳟卵巢表达量极显著高于其他组织.在240-330 dpf同一发育阶段中,β-tubulin基因在二倍体雌性虹鳟卵巢中的表达量较三倍体雌性虹鳟相对较高,且均存在极显著差异.免疫组化结果显示,240-330 dpf,β-Tubulin蛋白主要在二倍体虹鳟卵母细胞核内表达,在三倍体虹鳟卵原细胞核内表达量较少.推测三倍体虹鳟性腺败育可能与β-tubulin基因的低表达与组织异常定位有关,结果为进一步揭示三倍体虹鳟卵母细胞减数分裂受阻提供基础理论.