苏云金芽胞杆菌rocE基因的转录调控

[目的]rocE基因编码精氨酸降解途径中的精氨酸通透酶,通过分析苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt) rocE基因的转录活性,明确rocE基因的转录调控机制.[方法]通过RT-PCR确定rocE基因所在基因簇的转录单元;β-半乳糖苷酶活性测定分析rocE基因启动子(ProcE)的转录活性;采用同源重组技术敲除Bt HD73菌株的rocE基因;通过融合His标签的方法在大肠杆菌中表达纯化RocR蛋白的HTH结构域;通过凝胶阻滞实验明确RocR与rocE基因启动子的结合作用.[结果]在M9培养基中,精氨酸可诱导ProcE的转录活性;在SSM培养基和精氨酸诱导培养基中,与出发菌株HD73相比,ProcE在sigL(编码Sigma54因子)突变体和rocR突变体中的转录活性显著下降.RocR-HTH蛋白与ProcE有结合作用.rocE基因的缺失对菌体生长和Cry1Ac蛋白产量无显著影响.rocE缺失突变体的芽胞形成率为65.5％,HD73出发菌株为85.7％,显著性分析结果表明差异显著(P＜0.05).[结论]rocE基因的转录活性受Sigma54的控制,并受RocR正调控.rocE基因的缺失影响菌株的芽胞形成率.