实时荧光重组酶聚合酶扩增技术(RPA)快速检测Ⅱ型鲤疱疹病毒

[背景]Ⅱ型鲤疱疹病毒(Cyprinid Herpesvirus 2,CyHV2)感染鲫引起的疱疹病毒性造血器官坏死病(Herpes Viral Haematopoietic Necrosis,HVHN)是鲫养殖业的主要病害,造成严重的经济损失.目前尚无治疗HVHN的有效药物.对CyHV2进行早期监测和有效防控是阻止该病暴发的有效手段.[目的]建立一种针对CyHV2的orf72基因的实时荧光重组酶聚合酶扩增技术(Recombinase Polymerase Amplification,RPA)检测方法,并评价其特异性和灵敏度.[方法]通过比较CyHV2五株毒株间orf72核苷酸序列,在保守区设计特异性引物和探针.设置5个反应温度,优化实时荧光RPA反应的条件.在最优的条件下验证实时荧光RPA检测方法在不同水产动物病毒间的特异性.以梯度稀释的CyHV2阳性DNA为模板比较实时荧光RPA与qPCR的灵敏度.[结果]实时荧光RPA能在37.8 ℃条件下20 min内快速准确地检测CyHV2病毒,而且种间特异性高,与其他病毒无交叉反应,反应灵敏度与qPCR相同.[结论]研究建立的实时荧光RPA可用于CyHV2的现场快速检测,具有一定应用价值.