利用细菌人工染色体技术构建整合F基因的重组MDV疫苗株

目的:预防马立克氏病病毒(MDV)和新城疫病毒(NDV)混合感染鸡引起的疾病,构建表达NDV F蛋白的MDV疫苗株CVI988 BAC重组载体,并包装成重组病毒,为疫苗免疫提供更多的重组疫苗选择.方法:首先利用PCR扩增带有卡那霉素(Kanamycin,Kana)抗性基因片段的F基因,采用同源重组的方法将其整合到CVI988 BAC上,进一步诱导I-SceI表达敲除Kana基因而获得重组质粒CVI988 BAC-F.通过磷酸钙法转染鸡胚成纤维细胞获得重组病毒.结果:Western blot和间接免疫荧光实验证实重组病毒能够表达F蛋白.病毒生长曲线和蚀斑大小测定结果表明,F基因的插入不影响病毒的体外增殖.结论:利用BAC技术成功构建了整合F基因的重组MDV病毒CVI988 BAC-F,为MDV重组疫苗研发,防控NDV与MDV共感染奠定了基础.