利用DNA Assembly方法构建重组腺病毒载体

目的:建立一种基于DNA Assembly方法的重组腺病毒载体构建方法.方法:首先,通过设计合适的酶切位点及同源臂,采用了传统的限制性内切核酸酶连接方法和DNA Assembly方法获得63型猩猩腺病毒(Chimpanzee adenovirus serotype 63,ChAd63)的骨架质粒 pChAd63.随后,采用Sca Ⅰ单酶切携带EGFP基因的穿梭pShuttle63/EGFP,Hpa Ⅰ单酶切pChAd63,以DNA Assembly方法,获得重组腺病毒载体pChAd63/EGFP.最后,在293细胞中拯救获得重组腺病毒rChAd63/EGFP.结果:采用DNA Assembly方法成功构建了重组腺病毒载体pChAd63/EGFP,并拯救出重组腺病毒rChAd63/EGFP.结论:DNA Assembly可用于重组腺病毒载体的构建,有利于提高重组腺病毒载体的构建效率.