兔源强毒力金黄色葡萄球菌环介导等温扩增快速检测方法的建立

为建立检测兔源强毒力金黄色葡萄球菌的快速检测方法,本实验根据GenBank中登录的金黄色葡萄球菌pvl基因保守序列设计了 2对引物,经反应条件优化,建立了检测兔源强毒力金黄色葡萄球菌的环介导等温扩增(LAMP)快速检测方法.结果显示,该LAMP快速检测方法最优反应条件为:外引物和内引物的浓度比为1:7,反应温度为65℃,反应时间为60min.利用细菌基因组DNA提取试剂盒提取兔源强毒力金黄色葡萄球菌、低毒力金黄色葡萄球菌、多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏杆菌、肺炎克雷伯菌和大肠杆菌DNA,利用该方法检测,结果显示仅兔源强毒力金黄色葡萄球菌检测为阳性结果,其他均为阴性,无交叉反应,该方法特异性较强;将兔源强毒力金黄色葡萄球菌基因组DNA的浓度设置为1×108拷贝/μL～1x100拷贝/μL,利用本研究建立的方法检测,结果显示对兔源强毒力金黄色葡萄球菌基因组DNA的最低检出限为1×102拷贝/μL,其敏感性为双重PCR方法的100倍,敏感性高;利用该方法进行批内和批间重复性试验,结果均一致,重复性较好.利用该方法检测88份临床样品,结果显示与已报道的双重PCR方法检测结果的符合率为100％.本研究在国内首次建立了兔源强毒力金黄色葡萄球菌LAMP方法,为该病原的快速检测提供了有效的技术手段.