利用荧光指示分子IeGFP比较vip3A和cry1Ia基因启动子活性

苏云金芽孢杆菌(Bt)的Vip3A和Cry1Ia蛋白质序列无同源性,但具有其他相似的特征,例如在孢子形成早期合成,然后跨膜转运至胞外.本研究以新型融合荧光蛋白IeGFP为报告分子,比较vip3A(Pv)和cry1Ia基因(Pi)启动子的调控模式和活性.结果 表明,在大肠杆菌中,两者均为组成型启动子.通过荧光信号强度的比较发现,在大肠杆菌中,Pi活性显著强于乳糖操纵子调节基因启动子(PlacI,P＜0.01),但比PlacI增强型突变体(PlacIq,P＜0.01)和cry1Ac基因启动子(Pac,P＜0.01)弱.在3个Bt启动子中,Pv活性最弱,接菌12 h后,与PlacI接近(P＞0.05).在Bt菌株中,Pv对IeGFP的表达调控与之前报道的Pi相似.启动子的Shine-Dalgarno(SD)序列与目的 基因起始密码子(AUG)之间的间隔区域在调节细菌的蛋白质翻译效率方面发挥重要作用.本研究中构建的大部分Pv与Iegfp基因的间隔区域突变,均导致相应大肠杆菌和Bt细胞的荧光强度显著降低(P＜0.05),说明融合荧光蛋白IeGFP具有较好的灵敏度.该研究不仅确定了2种启动子在Bt和大肠杆菌中的活性,而且验证了IeGFP指示弱启动子活性的可行性.