甲型肝炎病毒滴度检测方法的优化与验证

目的 对优化后的甲型肝炎病毒滴度检测方法进行验证.方法 分别使用甲型肝炎病毒滴度检测的常规方法(每个细胞培养瓶中加入胰酶消化,收集后经超声破碎、氯仿抽提、聚乙二醇6000浓缩等步骤,收获病毒.滴定期间病毒在35 ℃吸附4h,中间轻摇2次)和优化方法(在每个细胞培养瓶中加入1％ Triton X-1001 mL,置35℃培养箱中30～ 40 min,收获病毒.滴定期间病毒在35℃吸附1.5h,中间轻摇1次)进行滴度检测,同时对优化后的方法进行包括重复性、中间精密性(准确性)及特异性(专属性)的方法学验证,并使用SPSS 20.0统计学软件对试验数据进行统计分析.结果 不同吸附时间的病毒增殖培养实验病毒滴度3次检测结果均在8.33～8.50之间,显示优化方法与常规方法一致.优化方法的重复性验证中,取6批样品,分别检测3次,检测结果差异均无统计学意义(P1f第1次与第2次)=0.694,P2(第2次与第3次)=0.694,P3(第1次与第3次)=1.000,P＞0.05);中间精密性(准确性)验证中,2组实验人员分别使用常规方法和优化方法进行病毒滴度检测,其检测结果差别较小,组间差异无统计学意义(P=0.599,P＞0.05);特异性(专属性)验证中,用常规检测方法及优化后的检测方法同时检测6批样品,其检测结果差异无统计学意义(P=0.203,P＞0.05).结论 甲型肝炎病毒滴度检测优化方法可以代替常规方法进行滴度检测.