甲型肝炎病毒在人胚肺二倍体细胞核酸增殖培养模型的建立

目的 采用人胚肺二倍体细胞(2BS细胞)培养,结合实时荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)检测,开展甲型肝炎病毒(HAV)在2BS细胞核酸增殖培养模型的建立研究.方法 将不同浓度的HAV活病毒感染2BS细胞,分别于感染后0、8、10、14、20 d收获HAV感染的细胞,应用已建立的HAV核酸检测和抗原检测方法分别检测HAV病毒核酸含量和抗原含量的动态变化.结果 HAV在2BS细胞中可有效复制和扩增,高剂量组以1×104 CCID50/mL HAV感染0d即可检测到HAV核酸,10～20 d病毒核酸达到峰值7.607 lg copies/μL;中剂量组以1x 102 CCID50/mL HAV感染6d可检测到HAV核酸,6～10d病毒增殖明显(P＜0.05),14～20 d病毒核酸含量达到峰值7.074 lg copies/μL并趋于稳定;而低剂量组以1 CCID50/mL HAV感染后,10 d HAV开始增殖,20 d病毒核酸含量与中、高剂量组别相近且基本达到峰值;当HAV感染2BS细胞10d时,病毒核酸检出拷贝数与感染HAV浓度呈良好的线性关系,可根据标准曲线准确反映样品中的HAV活病毒含量.细胞培养结合病毒抗原表达也可有效反映HAV的扩增情况,但较病毒核酸的出现呈明显滞后,且当样品中抗原含量低时,至少需要20 d以上才可完全检测到病毒抗原的表达.结论 应用2BS细胞培养和qRT-PCR检测建立了2BS细胞HAV核酸增殖模型,可快速、准确地反映HAV活病毒在细胞中的动态感染和增殖情况,可应用于HAV活病毒的快速定量、病毒特性、药物筛选和疫苗评价等相关研究.