流感疫苗毒种中3种外源性禽病毒荧光定量PCR检测方法的实验室间验证

目的 实验室间验证流感疫苗毒种中3种外源性禽病毒的荧光定量PCR(Q-PCR)检测方法.方法 联合4家实验室对已建立的流感疫苗毒种中禽腺病毒Ⅰ型[鸡胚致死孤儿病毒(chicken embryo lethal orphan virus,CELO)]、禽腺病毒Ⅲ型[减蛋综合征病毒(egg drop syndrome virus,EDS)]及禽白血病病毒(avian leukosis virus,ALV)Q-PCR检测方法,从灵敏度、特异性、重复性、病毒污染模拟试验及盲样检测方面,开展实验室间方法学验证.结果 4家实验室间验证结果显示,Q-PCR检测方法的标准曲线R2值均大于0.99,扩增效率为93.263％～103.105％;灵敏度均达1×101 copies/μL;特异性为仅检出阳性目的病毒,其他病毒均无扩增曲线出现;试验内及试验间循环阈值(D)和拷贝数的CV均小于15％;病毒污染模拟试验中CELO、EDS和ALV最低检测限分别为1×10-7、1×10-4、1×10-3病毒掺入;盲样检测中4家实验室结果均一致.结论 外源性禽病毒Q-PCR检测方法得到了一致性结果,均具有良好的灵敏度、特异性、重复性,可用于流感疫苗毒种外源性禽病毒的快速检测.