TNF-α小分子抑制剂C87的纳米药物制备及其体内外活性研究

该研究首先制备并表征包载TNF-α小分子抑制剂C87的纳米粒子,进而评价其在L929细胞和小鼠自身免疫性肝损伤模型中抑制TNF-α细胞毒性的作用.采用纳米沉淀法制备载C87的纳米粒子(C87 NP),并对其理化性质及体外释放行为进行表征;在L929细胞中用MTT法分析C87 NP拮抗TNF-α细胞毒作用的效果;经尾静脉注射刀豆蛋白A(ConA)诱导小鼠发生自身免疫性肝损伤,采用C87 NP预给药方式,防治小鼠自身免疫性肝损伤;使用LEGENDplexTM分析小鼠血清中13种细胞因子的表达水平;流式细胞术分析肝和脾中T细胞及亚群、NK细胞等的分布、比例和数量.制备出的C87 NP具有较高(34.4％)的载药量,且稳定性好,其包封率为48.1％,C87 NP平均粒径为82.57 nm,多分散系数为0.115,呈电中性,透射电镜结果显示其为球形结构;该纳米粒子可在体外持续缓慢释放C87,持续时间不少于8 h;C87 NP可以在体外抑制TNF-α对L929细胞的杀伤能力(IC50=9.13 μmol/L),并呈浓度依赖性;动物实验结果显示,C87 NP治疗组小鼠的存活率为66.7％,进一步的生化和病理分析结果表明,ConA小鼠尾静脉给药12 h后,C87 NP预防性给药能显著降低血清中ALT、AST与部分细胞因子的水平(P＜0.01),减轻肝损伤,减少CD4+T、CD8+T、NK细胞等对肝脾的浸润(P＜0.01),提高脾脏Treg细胞比例(P＜0.05).该研究成功制备出纳米药物C87 NP,且C87 NP在体内外具有良好的抑制TNF-α细胞毒性的作用,这为小分子药物C87今后在临床上的应用奠定了基础.