同型半胱氨酸致神经管畸形小鼠模型的建立及其作用机制

目的 建立同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)致神经管畸形(neural tube defect,NTD)的小鼠模型,并探讨其作用机制.方法 以单独使用同型半胱氨酸硫代内酯(homocysteine thiolactone,HTL)及联合胱硫醚-β-合成酶(cystathio-nine-β-synthase,CBS)抑制剂氨基氧乙酸(aminooxyacetic acid,AOAA)建立小鼠NTD模型,其中单独使用HTL的剂量为 100、300、500、700mg/(kg·d),联用组中 HTL 的剂量为400、500、600 mg/(kg·d),AOAA 剂量均为30 mg/(kg·d),于小鼠孕6.5～10.5 d连续给药,均经腹腔注射.选择最佳剂量建立NTD 小鼠模型(NTD 组),同时设正常对照组.ELISA法检测孕鼠血液中Hcy水平及胚胎脑组织中S-腺苷同型半胱氨酸(S-adenosylhomocysteine,SAH)和S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,SAM)水平,Click-iT EdU 成像试剂盒检测小鼠胚胎神经上皮细胞的增殖情况,Western blot法检测胚胎脑组织中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达水平.结果 建立NTD的小鼠模型最佳方案为500 mg/(kg-d)HTL+30 mg/(kg-d)AOAA,该条件下NTD发生率最高,死亡率较低.与正常对照组比较,NTD组Hcy、SAH和SAM含量均显著升高(P＜0.01),SAM/SAH比值明显下降(P＜0.01);胚胎神经上皮细胞增殖受到显著抑制(P＜0.05);PCNA的表达水平显著下降(P＜0.05).结论 联合使用HTL与AOAA 成功建立了小鼠的NTD模型,抑制细胞增殖可能是导致NTD 发生的重要机制.