百日咳丝状血凝素与志贺毒素B亚单位的融合表达及其免疫保护效果评价

目的 融合表达百日咳丝状血凝素(filamentous haemagglutinin,FHA)片段FHA1877-2250与志贺毒素B亚单位(Shiga toxin B subunit,StxB)蛋白,并对融合蛋白StxB-Fha1877-2250的免疫保护效果进行评价.方法 设计引物将StxB片段连接至FHA1877-2250N-端,构建重组表达质粒pET-28a-FHA1877-2250和pET-28a-StxB-Fha1877-2250,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达的重组蛋白经镍柱亲和层析和复性后,通过皮下免疫小鼠,共3次,间隔2周.末次免疫后10 d,尾静脉采血,间接ELISA法检测血清抗体效价;血清体外杀菌试验检测杀菌效率;末次免疫后第14天,经腹腔接种2倍半数致死剂量(1.21×108 CFU)的百日咳Bp148株菌液,评价动物攻毒保护效果.结果 重组表达质粒经菌落PCR和测序证实构建正确.表达的重组蛋白FHA1877-2250、StxB-Fha1877-2250经SDS-PAGE和Western blot分析显示,相对分子质量分别约为43000和51000.StxB-Fha1877-2250免疫小鼠血清抗体效价可达1∶3200.StxB-Fha1877-2250组的血清杀菌效率比FHA1877-2250组略好.以百日咳Bp148菌株攻毒,FHA1877-2250、StxB-Fha1877-2250蛋白对免疫小鼠具有保护力,保护率分别为40％和60％.结论 重组融合蛋白StxB-Fha1877-2250相比于FHA1877-2250具有更好的免疫原性和保护效果,为百日咳亚单位疫苗的研究提供了新的思路.