多糖疫苗中十六烷基三甲基溴化铵和去氧胆酸残留量液相色谱串联质谱检测方法的建立及验证

目的 建立多糖疫苗中十六烷基三甲基溴化铵(hexadecyltrimethyl ammonium bromide,CTAB)和去氧胆酸(deoxycholic acid,OBA)残留量的液相色谱串联质谱(liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)检测方法,并进行验证.方法 建立以Kinetex色谱柱C18(2.1 mm×50 mm,2.6 μm)为固定相,5 mmol/L甲酸铵、乙腈为流动相的LC-MS/MS法,并验证方法的线性范围、精密性、准确度、检出限及定量限.采用建立的方法检测23批肺炎球菌多糖(1、2、3、4、5、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17A、18C、19A、19F、20、22F、23F和33F)、3批b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)粗糖和精糖、3批A、C、Y、W135群脑膜炎球菌粗糖和精糖中CTAB及OBA残留量.结果 CTAB浓度在1.56～50μg/L范围时,与峰面积呈良好的线性关系,回归方程为Y=133056X-29015,Re=0.9999;OBA浓度在6.25～100 μg/L范围时,与峰面积呈良好的线性关系,回归方程为Y=250.5 X-59.1,R2=0.9997;OBA及CTAB对照品6次重复进样检测的保留时间和峰面积RSD均＜2％;OBA和CTAB加标回收率均在91.8％～103.5％之间;OBA的检出限为1.02μ g/L,定量限为2.04 μg/L,CTAB的定量限为1.56 μg/L.4、9N、9V和15B型肺炎球菌多糖无明显CTAB检出,其他血清型均有不同程度检出;大部分血清型肺炎球菌多糖中无明显OBA检出.3批A、C、Y、W135脑膜炎球菌粗糖中CTAB残留量为112.40～1709.60 μg/L,对应批次精糖中CTAB残留量为0.08～ 43.20 μg/L.3批Hib粗糖中CTAB残留量分别为1265.10、1189.00和1513.30 μg/L,对应批次精糖中CTAB残留量分别为6.50、166.60、6.65 μg/L.结论 建立了多糖疫苗中CTAB和OBA的LC-MS/MS检测方法,该方法具有良好的精密性及准确度,可用于多糖疫苗及多糖结合疫苗中CTAB和OBA残留量的检测.