肠出血性大肠埃希菌 espO基因敲除菌株的构建及其生物学功能初步研究

目的:检测 espO基因敲除对肠出血性大肠埃希菌(EHEC)生物学特性的影响。 方法:自杀质粒pCVD442-Δ espO介导的两步法构建 espO基因敲除菌株(Δ espO)，pTrc99a质粒构建 espO基因回补突变株(CΔ espO)，不同EHEC菌株感染HeLa细胞以了解 espO基因在感染过程中的生物学功能与致死作用。 结果:PCR和电泳以及基因测序结果表明，Δ espO和CΔ espO突变株构建成功。与野生株相比，Δ espO和CΔ espO突变株的生长速度无明显差异，表明 espO基因不影响细菌的生长与繁殖。此外，EspO可激活肿瘤坏死因子(TNF)诱导的NF-κB信号通路，而效应蛋白NleB能够抑制该激活过程。在细菌感染细胞试验中，EspO不能抑制TNF和TRAIL(TNF-related apoptosis-inducing ligand)诱导的细胞死亡。 结论:本研究成功构建了EHEC espO基因敲除和回补突变株菌株，初步探究了 espO与宿主细胞的相互作用及该基因在感染过程中对细胞凋亡的影响，为后续深入研究细菌EspO蛋白的体外生物学活性以及体内感染过程中的致病作用提供实验依据。