一种可快速检测食品中酿脓链球菌和无乳链球菌的RPA方法的建立

为了实现食品中酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)和无乳链球菌(S.agalactiae)快速、高效检测,本研究建立了一种同时快速检测食品中这两种细菌的方法.本研究基于重组酶聚合酶等温扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)原理,选择酿脓链球菌致热外毒素B基因(speB基因)和无乳链球菌表面免疫蛋白基因(SIP基因)的保守序列分别设计RPA引物和探针,分析检测方法的特异性和灵敏性,采用模拟污染实验验证检测效果.结果表明,检测时间为20 min;酿脓链球菌和无乳链球菌分别对speB和SIP基因检测结果为阳性,其他链球菌和非链球菌检测结果为阴性;方法对speB和SIP基因的检出限均可达100 copies/反应;酿脓链球菌和无乳链球菌低菌量污染的样品增菌液,在经过短暂几小时的增菌培养后可被检出阳性信号.本研究建立的检测方法快速、准确、灵敏,可同时作为食品中酿脓链球菌、无乳链球菌的快速检测方法,具有较强的应用价值.