过表达水牛睾丸FGF2基因维持水牛精原细胞的体外培养

水牛睾丸支持细胞(Sertoli cells)是环绕在精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)周围的一类体细胞,为SSCs增殖提供物理支持及稳定的环境,同时参与血睾屏障形成.支持细胞可分泌FGF2,从而提高SSCs存活和增殖.至今为止,水牛SSCs培养体系仍然面临许多挑战,推测内源性的FGF2可提高SSCs在体外培养时的自我更新和增殖能力.为此,本研究探索了水牛支持细胞的分离纯化方法,对比了幼年和成年水牛支持细胞FGF2的表达差异,并构建了支持细胞FGF2过表达细胞系.结果表明,幼年水牛支持细胞作为饲养层更有利于维持SSCs的增殖.实时荧光定量PCR显示FGF2在过表达细胞系中的水平显著高于幼年水牛支持细胞对照组的水平.与幼年水牛支持细胞作为饲养层共培养的SSCs相比,FGF2过表达支持细胞系作为饲养层共培养SSCs显著提高PLZF(P＜0.05)、OCT4(P＜0.05)和GFRα1(P＜0.05)的表达水平,并且明显改善了SSCs的体外培养性能.本研究为优化水牛SSCs体外培养系统提供理论和实践基础.