五子衍宗丸中所含药物盐制后组方对大鼠生精细胞凋亡的影响

目的:观察由不同炮制品组方的五子衍宗丸对肾精亏虚大鼠生精细胞凋亡的影响,探讨其对生精细胞的保护作用.方法:将SD大鼠随机分成空白组、模型组、全生品组、药典组、盐制组,每组8只.通过给予雷公藤多苷片复制肾精亏虚模型(剂量20 mg· kg-1),利用流式细胞术(FCM)分析睾丸中生精细胞凋亡情况,运用免疫组化(IHC)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测睾丸中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平.采用高效液相色谱法(HPLC)比较由不同炮制品组方的五子衍宗丸中8个成分(绿原酸、鞣花酸、金丝桃苷、异槲皮苷、毛蕊花糖苷、紫云英苷、山柰酚、五味子醇甲)的含量,流动相乙腈(A)-0.4％磷酸水溶液(B)梯度洗脱(0～5 min,5％～15％A;5～10 min,15％～17％A;10～25 min,17％A;25～35 min,17％～26％A,35～60 min,26％～56％A),检测波长254 nm.结果:与模型组比较,各给药组对生精细胞总凋亡率,Bcl-2和Bax表达均有改善作用,且药典组与盐制组有显著作用(P＜0.01);同时,药典组与盐制组的改善作用明显优于全生品组(P＜0.05).药物炮制后组方的五子衍宗丸中绿原酸、金丝桃苷、异槲皮苷、毛蕊花糖苷含量增加;盐制组鞣花酸含量增加,但药典组鞣花酸含量减少;盐制组样品中毛蕊花糖苷、紫云英苷、山柰酚、五味子醇甲的含量高于药典组样品.结论:五子衍宗丸可能通过抑制Bax和促进Bcl-2的蛋白表达来减少大鼠睾丸中生精细胞的凋亡,发挥其补肾益精作用;组方药物炮制后抗生精细胞凋亡作用增强可能与炮制后化学成分含量的变化有关.