人参-三七-川芎提取物对内皮微粒介导HUVECs衰老的干预作用

目的:观察人参-三七-川芎提取物对延缓内皮微粒(EMPs)诱导的血管内皮细胞衰老的影响,并探索其作用机制.方法:以人脐静脉内皮细胞(HUVECs)为研究对象,复制性衰老10～12代细胞作为衰老模型,实验分为年轻组(2～4代细胞)、衰老组(10～ 12代细胞)、单纯EMPs干预组(提取衰老细胞产生的EMPs来干预年轻细胞)以及中药低、中、高剂量组(200,300,400 mg· L-1).结合衰老相关β半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色法和碘化丙啶(PI)单染法检测细胞周期来判断细胞衰老程度.采用细胞活性和细胞增殖检测(CCK-8)法筛选给药浓度,两步离心法分离出EMPs,藻红蛋白(PE) CD31抗体或异硫氰酸荧光素(FITC) Annexin V标记分离得到的EMPs,并用流式细胞术进行定量,2',7'-二氯荧光素二乙酸酯(DCFDA)染色检测细胞内活性氧(ROS)水平.结果:与衰老组比较,中药给药组可显著降低衰老细胞SA-β-gal活性(P＜0.01),使细胞周期S期阻滞得到恢复(P＜0.01),并降低衰老细胞分泌CD31+ EMPs及Annexin V+ EMPs的数量(P＜0.05).与年轻组比较,单纯EMPs干预组可诱导年轻细胞SA-β-gal活性增强(P＜0.01),细胞周期阻滞于S期(P＜0.05),与衰老组比较,但在EMPs干预的同时给予中药干预后,可明显抑制EMPs介导增强的SA-β-gal活性(P＜0.05),并使S期阻滞得到恢复.中药组还可明显抑制EMPs诱导的细胞内ROS增高(P＜0.05,P＜0.01).结论:人参-三七-川芎提取物可通过影响EMPs延缓复制性血管内皮细胞衰老,其机制可能与抑制EMPs诱导的细胞内ROS水平增高有关.