补肾化痰方对去势骨质疏松模型大鼠Th17/Treg平衡机制的影响

目的:研究补肾化痰方在防治绝经后骨质疏松症中对免疫T细胞亚群辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)平衡的影响.方法:6月龄SD雌性大鼠60只,按随机数字表分为假手术组,模型组,戊酸雌二醇组(0.184 mg·kg-1),补肾化痰方低、中、高剂量组(4.7,9.4,18.8 g·kg-1),除假手术组外,其他组均采用手术切除卵巢,制作绝经后骨质疏松症模型.术后1周灌胃给药,模型组和假手术组以等体积的生理盐水灌胃,1次/d,灌胃12周后取材.运用微计算机断层扫描技术(Micro CT)检测大鼠骨量及骨微结构;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清中叉头框蛋白p3(Foxp3),维甲酸相关核孤受体yt(RORyt)含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测骨组织中Foxp3,RORyt mRNA表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测骨组织中Foxp3,RORyt蛋白表达量;运用流式细胞抗原检测,分析并比较各组Th17,Treg细胞的数量.结果:与假手术组比较,模型组大鼠骨量降低、骨小梁显著减少(P＜0.01);骨微结构破坏,血清中Foxp3浓度显著降低,RORyt浓度显著升高(P＜0.01),骨组织中Foxp3 mRNA及蛋白表达降低,RORγt mRNA及蛋白表达显著升高(P＜0.01),骨组织中Treg细胞数量减少(P＜0.01),Th17细胞数量增加,且Th17/Treg值显著升高(P＜0.01);与模型组比较,各给药组骨量明显增加(P＜0.05,P＜0.01),血清中Foxp3浓度升高,RORyt浓度显著降低(P＜0.01),骨组织中Foxp3 mRNA及蛋白表达明显升高(P＜0.05,P＜0.01),但低剂量组mRNA差异无统计学意义,RORyt mRNA及蛋白表达明显降低(P＜0.05,P＜0.01),骨组织中Treg细胞数明显升高,Th17细胞数量明显降低(P＜0.05,P＜0.01),且Thl7/Treg显著降低(P＜0.01).结论:补肾化痰方可以提高去卵巢大鼠骨量,改善骨微结构,并使骨组织中Treg细胞数量增加而Th17细胞数量减少.进而推论补肾化痰方可能通过调节Th17/Treg平衡,而发挥防治绝经后骨质疏松症的作用.