基于PI3K/Akt信号通路探讨金骨莲提取物抑制脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症反应的作用及机制

目的:探讨金骨莲提取物(JGL)对炎症的抑制作用及其机制.方法:实验分为空白组(10％胎牛血清),脂多糖(LPS)模型组(0.5 mg·L-1),JGL给药组(10,20,40,60,80,120,160,200,250,300 mg·L-1),JGL给药组同时给予LPS刺激(0.5 mg·L-1),培养24 h进行后续检测.采用细胞增殖与检测试剂盒(CCK-8)试剂检测JGL对RAW264.7细胞增殖活性的影响;采用Griess法检测一氧化氮(NO)的释放;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β),IL-6,IL-10和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)释放;采用实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)检测炎症相关因子诱导型一氧化氮合酶(iNOS),前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)/环氧合酶-2(COX-2)的表达及蛋白免疫印迹法(Westem blot)检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)途径关键蛋白的活化.结果:与空白组比较,LPS(0.5 mg·L-1)刺激24 h后能显著促进RAW264.7细胞增殖(P＜0.01),与模型组比较,JGL对细胞增殖无显著显著影响;与空白组比较,LPS(0.5 mg·L-1)能显著增加NO,IL-1β,IL-6,IL-10和TNF-α的释放(P＜0.01),与模型组比较,JGL(20～300 mg· L-1)给药24 h后能剂量依赖性显著抑制NO的释放(P＜0.01);与模型组比较,JGL各剂量组IL-1β,IL-6,IL-10均明显降低(P＜0.05,P＜0.01),但对TNF-α的释放未见明显的抑制作用;与空白组比较,LPS(0.5 mg·L-1)能显著诱导iNOS,PTGS2/COX-2基因表达(P＜0.05,P＜0.01),与模型组比较,JGL各剂量组能下调iNOS,PTGS2/COX-2 mRNA的表达(P＜0.05,P＜0.01);与空白组比较,LPS(0.5 mg·L-1)组PI3K/Akt通路显著活化(P＜0.01),JGL(10,20,40,80 mg·L-1)显著降低PI3K p110和p-PI3K p85蛋白及Akt磷酸化水平(P＜0.01),抑制PI3K/Akt通路活化.结论:金骨莲提取物能明显抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应,减少炎症因子的释放,其抗炎作用与抑制PI3K/Akt途径有关.