地黄RgMATE6转运蛋白基因的克隆、亚细胞定位与表达分析

目的 克隆地黄多药及有毒化合物外排(multidrug and toxic compound extrusion,MATE)转运蛋白基因RgMATE6,并进行亚细胞定位与时空表达分析,为深入研究其在地黄转运次生代谢产物中的分子功能奠定基础.方法 利用地黄转录组数据库候选基因序列,利用实时荧光PCR (RT-PCR)克隆RgMATE6基因;利用生物信息学软件对其编码蛋白的结构、理化性质、同源性和进化树进行分析;通过与绿色荧光蛋白(GFP)融合表达进行亚细胞定位;利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)的方法测定该基因的时空表达模式.结果 克隆获得1892bp的RgMATE6基因序列,RgMATE6基因编码524个氨基酸、具有2个典型的MatE结构域和12个跨膜结构;RgMATE6蛋白与越橘的VcMATE6蛋白亲缘关系最近;RgMATE6-GFP载体瞬时表达的结果发现RgMATE6蛋白定位在液泡膜上;qRT-PCR分析发现RgMATE6基因在地黄不同时期的根中表达最高,尤其是块根膨大前期.结论 RgMATE6蛋白定位在液泡膜上,在地黄块根膨大期的根中表达较高,初步表明RgMATE6可能参与地黄体内次生代谢产物向液泡转运的过程.