黄芪甲苷配伍三七总皂苷对OGD/R大鼠脑微血管内皮细胞增殖、凋亡及线粒体功能的影响

目的 观察黄芪甲苷(AST IV)配伍三七总皂苷(PNS)对氧糖剥夺后再复糖复氧(OGD/R)大鼠脑微血管内皮细胞(BMECs)增殖、凋亡及线粒体功能的影响.方法 差速密度梯度离心法提取BMECs,免疫荧光检测血管性血友病因子(vWF)表达对细胞进行鉴定,取第3代BMECs,采用AST IV与PNS高(100μmol/L+60μmol/L)、中(50μmol/L+30μmol/L)、低(25μmol/L+15μmol/L)剂量配伍预处理24 h,以OGD/R建立缺血再灌注损伤模型,同时设立正常组和模型组.CCK8法测定细胞增殖情况,LDH漏出率检测细胞损伤,AnnexinⅤ/PI双染检测细胞凋亡,TraKineTMPro活细胞线粒体染色试剂盒对线粒体进行染色,激光共聚焦观察线粒体结构,JC1染色测定线粒体膜电位变化情况.结果 成功培养分离BMECs,阳性表达vWF,与正常组比较,模型组细胞存活数量明显减少(P<0.05),LDH漏出率显著增加(P<0.01),细胞凋亡率显著增加(P<0.01);与模型组比较,AST IV与PNS不同剂量配伍均能促进BMECs增殖、抑制LDH的释放和抑制细胞凋亡(P<0.05,P<0.01).与正常组比较,模型组线粒体荧光强度明显降低,分布不均;与模型组比较,AST IV与PNS不同剂量配伍组深红色荧光强度有所增强.与正常组比较,模型组线粒体膜电位水平下降(P<0.01),与模型组比较,AST IV与PNS不同剂量配伍组线粒体膜电位明显增强(P<0.05,P<0.01).结论 AST IV配伍PNS在体外能促进缺血再灌注模型BEMCs细胞增殖,抑制细胞凋亡,降低LDH漏出率,其机制与保护线粒体,增加线粒体膜电位有关.