桃红四物汤对大鼠后肢缺血-再灌注损伤骨骼肌CaMKⅡ、PKC表达的影响

目的 观察桃红四物汤对大鼠后肢缺血-再灌注损伤骨骼肌钙调蛋白依赖性蛋白激酶II(CaMKⅡ)、蛋白激酶C(PKC)表达的影响,从Wnt/Ca2+信号通路角度探讨其作用机制.方法 取2月龄雄性SD大鼠80只,随机分成正常组、模型组、桃红四物汤组、阻滞剂组,每组20只.除正常组外,其他各组均阻断血流复制右后肢缺血-再灌注损伤模型,桃红四物汤组、阻滞剂组(FZR5、Wnt5a阻滞剂)在造模前分别予以桃红四物汤灌胃、阻滞剂腹腔注射预处理.DAPI法观察复灌后各组腓肠肌细胞凋亡变化;RT-qPCR检测复灌后(0、2、4、8 h)腓肠肌CaMKⅡ、PKC mRNA的表达;免疫组化(IHC)检测复灌后8 h腓肠肌中CaMKⅡ、PKC蛋白的阳性表达.结果 DAPI荧光染色结果显示,与正常组比较,模型组、桃红四物汤组、阻滞剂组大鼠腓肠肌细胞凋亡率明显升高(P<0.05);与模型组比较,桃红四物汤组和阻滞剂组大鼠腓肠肌细胞凋亡率明显降低(P<0.05).RT-qPCR和IHC结果显示,与正常组比较,模型组、桃红四物汤组、阻滞剂组CaMKⅡ、PKC蛋白和mRNA表达一致性上调(P<0.05);与模型组相比,桃红四物汤组、阻滞剂组CaMKⅡ蛋白和mRNA表达一致性下调(P<0.05),PKC mRNA表达下调(P<0.05),但PKC蛋白表达下调不明显(P>0.05),不同时间点显示相同倾向性.结论 CaMKⅡ、PKC为大鼠肢体缺血-再灌注骨骼肌损伤中的关键蛋白,桃红四物汤可通过调控Wnt5a/Ca2+信号通路下调CaMKⅡ表达来减轻肢体缺血-再灌注损伤,PKC不是Wnt5a/Ca2+信号通路中桃红四物汤的主要作用靶点.