调衡方多糖对巨噬细胞免疫调节作用及信号通路影响

目的 研究调衡方多糖(Tiaoheng prescription polysaccharides,ThPPs)对巨噬细胞的调节作用及相关信号通路的影响,探讨其调节机体免疫的作用机制.方法 获取小鼠腹腔巨噬细胞(macrophage,Mφ)并体外培养,随机分为空白对照组,LPS模型组(1μg·mL-1),ThPPs小剂量(50μg·mL-1)、中剂量(150 μg·mL-1)、大剂量(250μg·mL-1)组.干预24 h后收集细胞,采用CCK-8法考察其增殖活性;采用格里斯试剂法(Griess)检测细胞上清液中一氧化氮(NO)的分泌量;用免疫组化法测巨噬细胞表面白介素-12(IL-12)的表达量;采用实时荧光定量PCR测定Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、核因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子受体相关因子--6(TRAF-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的rnRNA表达情况.Western blotting法检测TLR4、NF-κB、TNF-α的蛋白表达情况.结果 ThPPs中、高剂量组与空白组比较,可显著增强Mφ对NO、IL-12分泌的功能(P＜0.01);Real-time PCR与免疫印迹法显示ThPPs中、高剂量组与空白组比较,可显著上调TLR4、TNF-α、NF-κB、MyD88与TRAF-6的基因表达及TLR4、TNF-α、NF-κB的蛋白表达(P＜0.01).结论 实验结果显示ThPPs可增强Mφ对NO、IL-12分泌的功能,上调TLR4、TNF-α、NF-κB、MyD88与TRAF-6的基因表达及TLR4、TNF-α、NF-κB的蛋白表达,而IL-12及TNF-α又是调控辅助性T细胞(Th)及Mφ分型的关键细胞因子.ThPPs激活Mφ信号通路可能与增强Mφ对NO、IL-12分泌的功能及活化NF-κB通路有关.