雷公藤甲素抑制类风湿性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞的自噬与存活

目的 探讨雷公藤甲素抑制类风湿性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(rheumatoid arthritis fibroblast-like syn-oviocytes,RA-FLSs)的自噬与存活.方法 体外培养人RA-FLSs细胞,使用不同浓度的雷公藤甲素(0、10、20、30、40、50 ng/mL)处理RA-FLSs细胞,处理24、48、72 h后,采用CCK-8试剂盒测定RA-FLSs的增殖能力,确定对细胞增殖能力抑制50％时所需的雷公藤甲素浓度(半数最大抑制浓度,IC50).基于RA-FLSs增殖能力测定的实验结果,选取最佳雷公藤甲素作用浓度处理RA-FLSs,处理24、48、72 h后,检测RA-FLSs自噬荧光强度;采用Western blot检测LC3 Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclinl、Bax和caspase-3蛋白表达水平.结果 雷公藤甲素呈剂量依赖性的抑制RA-FLSs细胞的增殖,雷公藤甲素浓度为40 ng/mL时,细胞增殖活力显著下降(P＜0.001),24、48、72 h的IC50分别是42.31、40.71、42.71 ng/mL.因此后续的实验选用雷公藤甲素的上药浓度为40ng/mL.与空白组相比,40ng/mL雷公藤甲素作用RA-FLSs24、48、72h后,均能减弱LC3 Ⅱ自噬荧光、显著降低自噬蛋白LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ、Beclin1表达水平(P＜0.05),显著增加凋亡蛋白Bax、cas-pase-3 表达水平(P＜0.05);且在处理48 h时,40 ng/mL雷公藤甲素抑制自噬及促进凋亡的作用较处理24 h及72 h强.结论 雷公藤甲素治疗类风湿性关节炎的作用机制可能与通过抑制RA-FLSs自噬,从而对RA-FLSs产生抑制增殖和促进凋亡作用.这一发现表明雷公藤甲素是一种治疗类风湿性关节炎的潜在药物.