KEAP1基因及其突变位点对非小细胞肺癌细胞株作用的实验初步研究

目的:研究KEAP1基因及KEAP1基因突变位点对肺癌细胞株的作用.方法:通过Western blot方法,比较携带KEAP1基因突变的肺癌细胞株(A549,NCI-H460,NCI-H838)与KEAP1基因野生型的肺癌细胞株(NCI-H292,NCI-H1299,95D,SPC-A1)之间,NRF2基因与NRF2下游基因HO-1的蛋白表达水平,检测并比较两组细胞的活性氧(ROS)含量;以新发现的非小细胞肺癌(NSCLC)病人的KEAP1体细胞突变作为模板构建KEAP1突变质粒,对自身存在KEAP1突变的肺癌细胞株A549,通过改造的pMSCV逆病毒转染体系,分别构建过表达空载,野生型及突变型KEAP1的A549稳定细胞株,比较过表达不同质粒的细胞间丙二醛(MDA)含量及NRF2下游抗氧化等相关基因的表达水平;通过克隆形成实验检测细胞增殖情况.结果:KEAP1基因突变组肺癌细胞株与KEAP1基因无突变的对照组细胞株相比,NRF2和HO-1蛋白表达显著增高,活性氧水平显著降低(P＜0.01);过表达野生型KEAP1与过表达空载的A549细胞相比,NRF2及其下游基因转录水平表达显著下降(P＜0.01),蛋白水平表达下降,细胞内丙二醛水平显著增高(P＜0.01),克隆形成率显著降低(P＜0.01),而过表达突变型KEAP1与过表达空载的A549细胞相比,NRF2及其下游基因表达、细胞内丙二醛水平、克隆形成率均无显著差异(P＞0.05).结论:KEAP1基因具有抑癌作用,其突变为失活型突变,突变后KEAP 1/NRF2通路激活,KEAP1基因突变可能通过改变细胞的氧化应激水平,促进肺癌的发生发展.