荧光定量PCR用于hTRIMCyPA抑制HIV-1的研究

目的:建立相对荧光定量PCR测定HIV-1晚期反转录产物方法,并以其评价hTRIMCyPA对HIV-1的抑制作用.方法:选择HIV-1的LTR区和HIV-1Gag之间的序列设计晚期反转录产物引物,以GAPDH基因为内参基因,建立SYBR GreenⅠ相对荧光定量PCR测定HIV-1晚期反转录产物的体系,并用来评价hTRIMCyPA重组蛋白对HIV-1晚期反转录产物的影响.结果:在建立的荧光定量PCR体系中,晚期反转录产物和内参GAPDH标准曲线的斜率分别为-3.381、-3.289.相关系数R2分别为0.9929、0.9937,均>0.99,表明二者的线性较好,晚期反转录产物基因及参照基因GAPDH基因扩增效率相同,可用于相对定量分析.hTRIMCyPA表达组HIV-1相对晚期反转录产物量明显少于空载体组.结论:本研究建立的定量HIV-1特异性反转录产物相对荧光定量PCR检测方法简单、高效和成本低廉,并且hTRIMCyPA对HIV-1反转录具有明显抑制作用.