甲型流感病毒HN单克隆抗体特性鉴定和应用

目的:制备抗甲型流感病毒单克隆抗体(mAbs)并分析抗体反应特性,评价mAbs在免疫荧光(IFA)和细胞免疫化学染色中的应用,初步建立H1N1流感病毒抗原检测的双抗体夹心ELISA方法.方法:取A/PR/8/34(H1N1)毒种接种于鸡胚尿囊腔,培养72 h后收获尿囊液,甲醛灭活,蔗糖密度梯度超离心法纯化,用于mAbs免疫原开发.病毒颗粒免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0进行融合,ELISA和IFA筛选稳定分泌抗甲型流感病毒mAbs的杂交瘤细胞株.ELI-SA、IFA、血凝抑制试验(HI)和中和试验(MN)分析抗体反应特性.依据mAbs特性建立细胞IFA试验、HI试验和双抗体夹心ELISA方法.结果:共制备13株mAbs,其中6株(PR8-10、PR8-19、PR8-20、PR8-26、PR8-28、PR8-30)具有较高血凝抑制活性,血凝抑制滴度≤3μg/ml.PR8-13和PR8-15无中和活性,其他11株均具有中和活性.部分mAbs可用于IFA试验和细胞免疫化学染色.依据PR8-24和PR8-25抗体反应特性初步建立H1N1流感病毒抗原检测的双抗体夹心ELISA法.结论:制备出可用于IFA试验和细胞免疫化学染色的A/PR/8/34(H1N1)mAbs,初步建立了快速H1N1检测的ELISA方法,为H1N1流感病毒或病毒血凝素蛋白快速定量方法建立提供依据.